1. Jika saya menerima tabung sel beku, dapatkah saya memasukkannya langsung ke dalam nitrogen cair untuk penyimpanan?
Dalam banyak kasus, sel yang diangkut pada es kering (-80 °C) dapat dimasukkan kembali ke dalam nitrogen cair dan kemudian dicairkan dengan cepat setelahnya.Namun, viabilitas sel dapat berkurang setelah pengobatan tersebut.Untuk beberapa garis sel sensitif, ini dapat membuat pemulihan sel lebih sulit.Fenomena ini diduga karena perubahan struktur kristal es di dalam sel sebagai akibat dari perubahan suhu.Oleh karena itu dianjurkan bahwa sel-sel harus dicairkan dan dibiakkan sesegera mungkin setelah diterima.Kurangi waktu penyimpanan pada -80 °C.Suhu ini hanya digunakan untuk transportasi.
2. Tindakan keamanan apa yang harus diambil saat mengeluarkan sel dari nitrogen cair untuk pemulihan?
Cryotube sel dalam nitrogen cair yang tidak sepenuhnya tertutup dan memiliki nitrogen cair yang bocor ke dalamnya dapat menyebabkan ledakan jika suhu cryotube meningkat tajam saat pencairan.Oleh karena itu disarankan agar kacamata dan sarung tangan pelindung dipakai saat mengeluarkan sel dari nitrogen cair.Untuk resusitasi, tabung pembekuan harus dikocok terus menerus dalam penangas air 37°C untuk mencairkan larutan beku sepenuhnya dalam waktu 1-2 menit.Setelah itu, bersihkan bagian luar tabung dengan kapas alkohol, kemudian bawa ke meja ultra-clean dan pindahkan sel ke dalam tabung sentrifus yang telah ditambahkan 10 ml media kultur, sentrifus dengan kecepatan 1000 rpm selama 5-10 menit, buang bagian luar tabung. supernatan, tambahkan jumlah yang sesuai dari media kultur dan inokulasi labu kultur dan inkubasi dalam inkubator CO2 5%.
3. Mengapa sel harus disimpan dalam fase uap tangki nitrogen cair daripada dalam fase cair?
Sel yang disimpan dalam fase gas nitrogen cair lebih mungkin untuk dihidupkan kembali.Sedangkan dalam fase cair nitrogen cair, jika tabung liofilisasi tidak disegel dengan benar atau mengalami kebocoran, kontak langsung antara sel dan nitrogen cair dapat membahayakan kelangsungan hidup sel setelah pencairan.
4. Untuk sel suspensi, bagaimana cara mengganti media kultur?
Kultur sel suspensi dapat dilakukan hanya dengan menambahkan media segar (jika ruang memungkinkan) atau dengan memisahkan sel dari media lama dengan sentrifugasi (100 xg selama 5 menit) dan kemudian mensuspensi kembali sel yang diendapkan dalam media segar.Namun, untuk sebagian besar garis sel suspensi, cukup menambahkan media adalah metode yang lebih baik.Either way, media perlu diperbarui sebelum sel mencapai kepadatan saturasi terbesarnya.Kepadatan saturasi sel bervariasi antara 3 x 10 5 dan 2 x 10 6 tergantung pada garis sel dan kondisi kultur (istirahat atau pengadukan, tingkat oksigenasi, dll.).Sel harus diencerkan ke konsentrasi sel yang lebih rendah untuk memungkinkan pemulihan nutrisi yang cukup untuk menjaga sel tumbuh secara logaritmik.Jika media hanya diubah tanpa mengurangi kepadatan sel, sel-sel akan dengan cepat menghabiskan media dan mati.Jika sel diencerkan di bawah kepadatan terkecilnya, mereka akan memasuki fase lag dan tumbuh sangat lambat atau akan mati.Setiap garis sel suspensi memiliki kepadatan saturasi dan interval lewat yang berbeda, sehingga jumlah sel harian adalah cara untuk memantau garis sel suspensi*.
5. Berapa tingkat CO2 yang direkomendasikan untuk kultur sel?
Meskipun tingkat CO2 dalam sistem kultur sel berkisar dari 0,03% hingga 40% (biasanya sekitar 0,03% CO2 di atmosfer), sangat umum untuk tidak menambahkan CO2 ke udara atau konsentrasi CO2 dari 5% hingga 10%.Penting untuk menyesuaikan konsentrasi natrium bikarbonat dalam medium agar seimbang dengan tingkat CO2 dalam fase gas.Sel menghasilkan CO2 dan membutuhkan sejumlah kecil asam karbonat untuk pertumbuhan dan kelangsungan hidup.Jika tidak ada CO2 yang ditambahkan dan sel bertambah banyak, 4 mM (0,34 g/L) natrium bikarbonat anhidrat dapat digunakan.Namun, tutup labu kultur harus dikencangkan pada saat ini.Jika sistem kultur membutuhkan 5% atau 10% CO2, gunakan masing-masing 23,5 mM (1,97 g/L) atau 47 mM (3,95 g/L) natrium bikarbonat pada 37°C, dengan pH awal sekitar 7,6.Dalam kondisi ini, labu harus dibiarkan terbuka atau cawan Petri harus digunakan untuk menjaga keseimbangan gas.
6. Mengapa beberapa sel membutuhkan natrium piruvat?Berapa banyak natrium piruvat yang harus saya tambahkan ke media?
Piruvat adalah metabolit asam organik dalam jalur glikolitik* yang siap masuk dan keluar sel.Oleh karena itu, penambahan natrium piruvat ke dalam medium menyediakan sumber energi dan sumber karbon untuk anabolisme, membantu mempertahankan sel tertentu, membantu kloning sel atau diperlukan ketika konsentrasi serum dalam medium berkurang.Natrium piruvat juga membantu mengurangi sitotoksisitas yang diinduksi fluoresensi.Natrium piruvat biasanya ditambahkan pada konsentrasi akhir 1 mM.larutan natrium piruvat yang tersedia secara komersial biasanya adalah larutan penyimpanan 100 mM (100X).
Diterjemahkan dengan www.DeepL.com/Translator (versi gratis).
Waktu posting: 21 Juni-2022